Пробирка полимерная с наполнителями (зондом и транспортной средой AMIES с углем), стерильная, Greetmed

Материал головки. вискоза

Упаковка. инд. упак. / 100 шт.

Транспортная среда Эймса представляет собой очередную модификацию базовой транспортной среды Стюарта. Эта среда способна более 3-х дней поддерживать микроорганизмы, такие как Neisseria sp. Haemophius sp. Corynebacteria, Streptococci, Enterobacteriaceae и др. однако наилучшие результаты даёт культивирование в течение первых 24 часов. Уголь поглощает токсичные для бактерий вещества. Тампон-зонд упакован в ударопрочную ПП-пробирку (13*155 мм). Пробирка снабжена этикеткой, на которой указаны: номер партии, дата стерилизации, срок годности, компания-производитель, компания-поставщик, регистрационное удостоверение, а также предусматривает место для нанесения сведений о пациенте и пробе. Край этикетки скреплен с пробкой, закрывающей пробирку с тампоном - этикетка служит контролем первого вскрытия.

Хранить при температуре не ниже + 5 °С и не выше + 25 °С.

Регистрационное удостоверение № ФСЗ 2012/11857 от 28.03.2012 г.

© 1992—2016 МиниМед

Питательные среды

причем не менее 8 – 12 часов при комнатной температуре, и, в то же время, обязана предупредить или в значительной степени лимитировать размножение микроорганизмов.

Последнее особенно важно. Необходимо сохранить жизнеспособность той части патогенной микрофлоры, которая вне хозяина быстро гибнет, особенно при условии конкурентного роста менее требовательных микроорганизмов. Как уже отмечено, эта ситуация встречается очень часто, если исследуется раневое отделяемое, кишечное содержимое, мокрота, мазки из зева и некоторые другие биосубстраты. Облигатно анаэробные бактерии, пневмококки, гемофильные бактерии, нейссерии и многие другие микроорганизмы трудно выделить из биоматериала, если параллельно идет процесс интенсивного размножения сапрофитных бактерий или более жизнестойких болезнетворных микроорганизмов. Кроме того, гибель требовательных бактерий определяется созданием неблагоприятных для них условий, таких как неблагоприятные рН, окислительно-восстановительный потенциал, наличие или отсутствие свободного кислорода, а также действие антимикробных метаболитов, которые при определенных условиях могут образовывать актиномецеты, псевдомонады, эшерихии и другие содержащиеся в образце микроорганизмы.

Опыт создания и использования транспортных питательных сред велик и формально велика их номенклатура. Однако фактически в мировой практике стабильно используют только две транспортные среды, которые именуют по фамилиям их создателей: среда Эймса и среда КериБлейра, и которые являются наиболее универсальными транспортными средами для сохранения подавляющего большинства видов бактерий. Среда Эймса предназначена для широкого круга бактерий, среда Кери-Блейра для кишечных микроорганизмов.

Среда Кери-Блейра была предложена разработчикам в 1954 году. За прошедший длительный период ее рецептура фактически не менялась. Не вызывало разночтений и назначение среды –– изначально оно трактовалось как сохранение микроорганизмов при транспортировании с акцентом на микроорганизмы кишечника.

Микроорганизмы кишечника многообразны, они включают представителей резидентной и транзиторной микрофлоры. Последняя в свою очередь может включать самые разнообразные бактерии и грибы, в т.ч. сапрофитные. В то же время, практика микробиологических служб клинических учреждений нацелена на выделение определенного круга микроорганизмов кишчника, прежде всего представителей семейства энтеробактерий (шигеллы, сальмонеллы), реже т.н. неферментирующих грамотрицательных бактерий, кишечных кокков и дрожжеподобных грибов.

Транспортная среда Кери-Блейра предупреждает гибель микробных клеток, сохраняет их жизнеспособность, но при этом препятствует размножению. Эти свойства среды обеспечиваются ее компонентным составом. Низкая питательная ценность и, прежде всего, отсутствие источников азота и углерода, как ключевых элементов развития популяции, ограничивает процессы роста и размножения микроорганизмов.

Процедура использования этой среды заключается в следующем: расплавленную среду Кери-Блейра разливают в стерильные пробирки по 6 – 9 мл. Объем среды в пробирках определяется техникой посева. При посеве мазка, взятого тампоном на тампонодержателе, достаточен небольшой столбик среды –– 6 мл. При прямом посеве биоматериала (без тампона) объем среды в пробирке увеличивают. В таком виде среду можно длительно хранить при температуре 2 – 8 о С.

Биологический материал погружают в столбик среды таким образом, чтобы он не оставался на ее поверхности. После этого пробирку с засеянной средой помещают в контейнер и направляют в лабораторию.

Среда Кери-Блейра сохраняет жизнеспособность требовательных бактерий около суток, после чего отмечают постепенную гибель клеток. Поэтому пересев с транспортной среды на обогащенные, дифференциально-диагностические или иные питательные среды необходимо

проводить в максимально доступные сроки. Вместе с тем, есть данные о том, что сальмонеллы в этой среде сохраняют жизнеспособность несколько месяцев.

Среда Эймса используется как транспортная для широкого круга микроорганизмов самых разнообразных биологических субстратов (гной, раневое отделяемое, мокрота, СМЖ и др.), кроме кала. Среда Эймса может быть с углем и без него:

Уголь добавляют в среду Эймса для сорбции микробных метаболитов, негативно влияющих на высокочувствительные патогенные микроорганизмы. В частности, это условие особенно важно для сохранения жизнеспособности гонококков.

Техника посева на среду Эймса такая же, как и на среду Кери-Блейра.

Противоречиво мнение о пригодности среды Эймса для транспортировки биосубстратов с облигатно-анаэробными бактериями. Безусловно, наличие низкого редокс-потенциала, который обеспечивается тиогликолятом натрия, а также столбик полужидкого агара, в который погружается биоматериал, ограничивают контакт микроорганизмов с атмосферным кислородом и поступление его в среду в растворенном виде, что может способствовать сохранению жизнеспособности ряда видов облигатно-анаэробных бактерий (наиболее демонстративны в этом отношении клостридии). Однако среда не обеспечит длительного сохранения тех облигатных анаэробов, которые высоко чувствительны к кислороду (например, некоторых видов бактероидов).

Кроме отмеченных выше, имеется широкий перечень транспортных сред, применяемых для транспортирования определенных видов микроорганизмов. Наиболее строгие требования предъявляются к транспортированию материала, подлежащего бактериологическому исследованию на наличие неспорообразующих анаэробных микроорганизмов. Эти бактерии быстро погибают при контакте с кислородом воздуха, что заставляет использовать для транспортирования материала сосуды, заполненные инертным газом. Так, например, хорошо известна жидкая обогащенная среда под инертным газом с гемином и витамином К для прямого посева крови и жидких биосубстратов. Она служит одновременно транспортной средой и средой для культивирования анаэробных бактерий, включая строгих анаэробов

Ряд целевых транспортных сред включает в себя антимикробные агенты (селективный компонент). Эти вещества подавляют рост сопутствующей микрофлоры, но не действуют на искомый микроб. Остальные компоненты среды обеспечивают его жизнеспособность. Примером может служить среда для листерий, которая одновременно является «голодной» и содержит вещества селективного действия (дано на литр):

Значительно более «богатой» представляется среда для транспортирования кампилобактерий (т.н. Кампи ТХИО среда), состав которой включает пять антимикробных препаратов (дано на литр):

Панкреатический перевар казеина

Приведенная пропись мало чем отличается от состава других питательных сред для кампилобактерий (см.заключительную главу). Очевидно, что разработчики среды сделали акцент, в первую очередь, на селекционирующем действии антибиотиков, сохранив, в целом, состав среды, достаточный для поддержания жизнеспособности многих микроорганизмов.

Такой же принцип использован в транспортной среде для хламидий. Кроме того, в ней учтена возможность применения для селекции осмотического фактора (дано на литр).

Сыворотка крови крупного

Антибиотики и сыворотку асептично вводят в стерильную питательную среду перед ее разлитием во флаконы и пробирки.

Существует ряд достаточно сложных по составу транспортных питательных сред для нейссерий, микоплазм и их сочетаний преимущественно в биосубстратах, полученных из мочеполового тракта. Некоторые варианты рассматриваются как транспортные среды для требовательных бактерий в целом, но особенно для нейссерий. Пропись одной из них, принадлежащей к большой группе т.н. Transgrow Medium, приведена далее (дано на литр).

Панкреатический перевар казеина

Антибиотическая добавка включает ряд антибиотиков, призванных придать среде селективные свойства. Имеется ряд предложений, ни одно из которых в полной мере, естественно, не может обеспечить гарантированное подавление роста сопутствующих микроорганизмов. В

разных источниках наиболее часто упоминают следующий состав (на литр среды добавляют 10 мл раствора антибиотиков).

В заключение следует еще раз подчеркнуть, что несмотря на большое число предложенных прописей транспортных сред, в микробиологической (медицинской) литературе наиболее часто упоминают среды Эймса и Кери-Блейра. Ряд авторов считает приемлемой среду Стюарта, которая, фактически, является предшественницей двух других. Среда Эймса большинству авторов представляется предпочтительней, чем среда Стюарта.

ГЛАВА 8. ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИИ

Среди возбудителей заболеваний человека энтеробактерии относятся к числу относительно нетребовательных микроорганизмов. Они способны давать рост на различных базовых питательных средах, используемых в микробиологических исследованиях. Однако семейство Enterobacteriaceae достаточно обширно; оно объединяет разные по своим свойствам бактерии. Кроме того, те области человеческого тела, где многие представители семейства являются объектом естественного обитания или паразитирования, обильно населены резидентной микрофлорой. Вот почему питательные среды, используемые при работе с энтеробактериями, в первую очередь решают задачу их селективного выделения и бактериологической диагностики. Это характерно как для отечественной, так и зарубежной практики.

Согласно многим отечественным методическим рекомендациям и указаниям, в том числе одобренных Минздравом, как обязательные при бакдиагностике энтеробактерий предложено использовать среды обогащения, среды для селективного выделения и дифференциации. Их перечень приведен в таблице. Названы те среды, которые освоены отечественными производителями, а также те из них, чье внедрение в микробиологическую практику признано перспективным.

Отечественные рекомендации в принципиальном плане мало отличаются от каждодневной практики применения питательных сред за рубежом. Питательные среды для энтеробактерий сконструированы таким образом, чтобы использовать ростовые особенности отдельных родов и видов и их способность конвертировать тот или иной субстрат. В следующей таблице 7 выборочно обобщены те свойства энтеробактерий, которые учтены и успешно реализованы в питательных средах для дифференциации микроорганизмов этого семейства.

Согласно рекомендациям Всемирной организации здравоохранения (1990 г.) в бактериологических лабораториях для работы с энтеробактериями рекомендованы следующие питательные среды:

транспортные среды –– Эймса, или Кери-Блейра, или Стюарта; базовые среды – кровяной агар, агар на переваре сои (tryptic soy agar);

селективные и дифференциально-диагностические среды –– ацетатный агар, пептонная вода с реактивом Андреде, среда Клиглера, агар МакКонки, жидкая среда для определения уреазы и образования индола, среда с дезоксихолатом и цитратом, SS-агар (как альтернатива среды с дезоксихолатом), цитратный агар Симмонса. К этой же группе питательных сред может быть отнесен названный в перечне brolacin agar, более известный в России, как CLED-агар, выпускаемый НПО «Питательные среды», г.Махачкала (среда, содержащая цистин, лактозу и индикатор и дозированная по электролитному составу). Хотя, строго говоря, эта среда предназначена для выделения не только энтеробактерий.

Заслуживает упоминания еще один зарубежный опыт.

В практике работы микробиологов США при выделении энтеробактерий из кишечного содержимого предложено использовать следующие группы питательных сред.

1. Как транспортную –– среду Кери-Блейра.

2. Дифференциально-диагностические. агар МакКонки и ЕМВ-агар (с эозином и метиленовым голубым).

3. Умеренно селективные. гектоен-энтеро агар, SS-агар (шигелла-сальмонелла агар), XLDагар (с ксилозой, лизином и дезоксихолатом).

4. Высоко-селективные среды: агар с бриллиантовым зеленым и висмут-сульфит агар.

Естественно, что все перечисленное не исключает применения базовых питательных сред, прежде всего питательного агара с добавлением бараньих эритроцитов.

Назначение транспортной среды очевидно. Вторая группа сред позволяет отдифференцировать культуры, ферментирующие лактозу, от лактозонегативных. Следующая (умеренно селективная среда) обеспечивает рост сальмонелл и шигелл, в то время как рост других энтеробактерий частично или полностью подавляется. Последняя группа предназначена для выделения сальмонелл, но рост шигелл на них не гарантирован.

Питательные среды, наиболее часто используемые при выделении и дифференциации энтеробактерий

черной зоной вокруг или без нее

Завершая рассмотрение практики использования питательных сред для работы с энтеробактериями в США, следует пояснить, что скрывается за не всегда привычными для отечественной практики названиями. ЕМВ-агар (с эозином и метиленовым синим) известен в России как агар (или среда) Левина. SS-агар также выпускается отечественными производителями, как альтернатива среде Плоскирева. Правда, следует отметить, что зарубежный вариант имеет несколько больший набор источников азота и в некоторых его модификациях соли желчных кислот заменены на дезоксихолат натрия. В целом, различия не носят принципиального характера. НЕагар (hektoen enteriс agar) выпускается несколькими фирмами, но различия в рецептуре, в целом, незначительны. Приведенная далее дана по руководству R.Atlas (1997 г.): сахароза, салицин, пептон, дрожжевой экстракт, соли желчных кислот, натрия тиосульфат, аммонийный цитрат

железа, фуксин кислый, бромтимоловый синий, некоторые соли, агар-агар, рН 7,6 ± 0,2. Среда обладает селекционирующим действием и позволяет дифференцировать колонии по ферментации сахаров и образованию сероводорода. XLD-агар включает ксилозу, лактозу и сахарозу, L-лизин, тиосульфат натрия, аммонийный цитрат железа, дрожжевой экстракт, дезоксихолат натрия, феноловый красный, хлористый натрий, агар-агар. Дифференциация бактерий идет не только по сахаролитическому действию и сероводороду, но и по образованию микробом лизиндекарбоксилазы.

Провести четкую грань между средами накопления (обогащения) и селективными средами сложно, поскольку большинство первых содержит селекционирующий компонент. Различие между ними скорее сводится к консистенции среды –– среды обогащения являются жидкими.

Хотя в принципиальном плане среды обогащения могут быть созданы для многих родов (видов) энтеробактерий, наиболее распространенные варианты селективных накопительных сред предназначены для выделения сальмонелл, в меньшей степени –– шигелл. Компонентами, определяющими избирательный рост сальмонелл, являются соли селенистой кислоты (селениты NaHSeO 3. Na 2 SeO 3 ), желчь и соли желчных кислот (преимущественно дезоксихолат натрия), соли магния, препараты иода, некоторые красители (бриллиантовый зеленый).

Одна из прописей селенитового бульона выглядит следующим образом.

Натрий сернистокислый кислый

Эта пропись приведена в отечественных методических пособиях.

Установление в селенитовом бульоне необходимого показателя рН среды и, особенно, поддержание его на должном уровне в процессе роста культур требует точного соблюдения соотношения селенита и веществ, обеспечивающих буферные свойства и рН среды (лактоза, фосфаты). В этом отношении натрий селенистокислый кислый (гидроселенит натрия, NaНSeO 3 ) имеет определенное преимущество перед селенистокислым натрием (Na 2 SeO 3 ). Однако последний также рекомендован в ряде прописей, и, как показал опыт некоторых лабораторий, может быть эффективно использован. Это вещество более доступно. Как правило, селекционирующее действие селенита достаточно для подавления роста эшерихий и энтерококков, обычной микрофлоры кишечного содержимого. Тем не менее, предлагается усилить селекцию путем добавления в среду бриллиантового зеленого (5 мг на литр среды без изменения концентрации селенита –– 4,0 г на литр).

Для выделения S.typhi и S.pаratyphi одним из крупных производителей питательных сред, фирмой Oxoid, рекомендовано заменить лактозу на маннит. Основой явились исследования, показавшие, что в этом случае возбудителей брюшного тифа и паратифа В выделяют чаще.

Для снижения токсического действия селенита на сальмонеллы предложено использовать L-цистин (20 мг на литр).

К числу признанных сред, способствующих преимущественному накоплению сальмонелл, относится бульон Мюллера (1923 г.), чаще используемый в модификации Кауфманна (1930 г.). Среда (бульон) Мюллера-Кауфмана в ее классической прописи (цит.по R.Аtlas, 1997) включает:

Панкреатический перевар казеина

В процессе изготовления среды первоначально смешивают все компоненты, кроме раствора Люголя и бриллиантового зеленого. После стерилизации кипячением этот раствор может храниться в охлажденном состоянии. Перед употреблением стерильно добавляют два последних компонента и разливают раствор в пробирки.

Несколько отечественных методических рекомендаций предлагают иной подход к приготовлению среды. Вначале готовят среду Мюллера:

Карбонат кальция (сухой, стерильный)

Бульон Хоттингера (120 – 130 мг% аминного азота)

Натрия тиосульфат 50% стерильный раствор

Карбонат кальция растворяют в бульоне Хоттингера и стерилизуют 30 мин при 121 о С. Затем в асептических условиях добавляют раствор Люголя и раствор тиосульфата натрия. После этого к 500 мл стерильной среды Мюллера добавляют 250 мл стерильной бычьей желчи и 50 мл 0,1% раствора бриллиантового зеленого. Смешивают и асептично разливают по пробиркам. Не стерилизуют. В отличие от зарубежной практики последнюю смесь называют средой Кауфмана (в зарубежной литературе средой или бульоном Мюллера-Кауфмана).

Среда Мюллера (без модификации по Кауфману) может сама по себе использоваться как накопительная для сальмонелл, однако, по ряду публикаций ее селективность недостаточна.

Агар МакКонки заслуживает упоминания в первую очередь как среда, нашедшая за рубежом самое широкое применение при работе с энтеробактериями. Она обладает как селективными, так и дифференциально-диагностическими свойствами. За почти 100-летний период после первого упоминания среды в медицинской литературе (1905 г) накопилось не менее

8 вариантов агара МакКонки и несколько прописей жидкой среды. Всех их объединяет обязательное присутствие в качестве селекционирующего вещества желчи, сахара (во всех случаях, кроме одного –– лактозы) и индикатора. Ферментация сахара придает определенный цвет колониям, что служит дифференцирующим признаком. Варьируя содержание в среде желчи или ее компонентов с определенной концентрацией солей таурохолевой, гликохолевой и дезоксихолевой кислот, меняют степень селективности агара, в первую очередь по подавлению роста стафилококков, энтерококков и роению протея. Одна из типичных рецептур агара выглядит следующим образом (на литр).

Отдельного упоминания заслуживает агар МакКонки с сорбитом. В нем учтено, что токсигенные штаммы, такие как E.coli 0157. Н7, продуцирующие веротоксин, не ферментируют сорбит. В то же время подавляющее большинство кишечных палочек иных сероваров (до 95%) сорбит ферментируют. Как те, так и другие утилизируют лактозу. Поэтому классический вариант агара МакКонки с лактозой для целей дифференциации в данном случае не пригоден. На среде с сорбитом токсигенные штаммы E.cоli 0157. Н7 дают бесцветные колонии, большинство других –– розовые. Среда МакКонки с сорбитом может дополнительно содержать кристаллический фиолетовый как ингибитор роста кокковой флоры, включая энтерококки.

Еще одна среда, использующая селекционирующие свойства желчи, согласно отечественным методическим указаниям имеет следующий состав (среда Рапопорт или. что было бы исторически справедливо, –– Рапопорт и Вайтруб):

Бульон мясопептонный или Хоттингера

Другой достаточно часто используемый селективный агент –– соли магния (обычно хлористый магний). Одним из первых их использовал Раппапорт (не путать с отечественным специалистом, названным выше).

Среда с магнием имеет ряд модификаций, которые часто обозначают общим названием –– бульон Раппапорт-Василиадис и, в зависимости от состава, используют как среду обогащения не только для сальмонелл, но и иерсиний (Y.enterocolitica). Селективность среды усиливают ведением в композицию малахитового зеленого и антибиотиков, а также варьируя содержание хлористого магния(от 13,0 до 40,0 грамм на литр).

Для выделения сальмонелл используют, в частности, среду следующего состава (на литр):

Папаиновый перевар соевой муки

Оксалат малахитового зеленого

Рекомендованная отечественными МУК магниевая среда содержит (на литр).

Бриллиантовый зеленый 0,5% раствор

Достаточный потенциал селективности заложен в антибиотиках и некоторых других веществах синтетической природы, обладающих определенным спектром противомикробного действия. При выделении энтеробактерий, особенно из кишечного содержимого, антимикробные соединения в питательных средах позволяют подавить или существенно ограничить рост грамположительных микроорганизмом и грибов. Среди препаратов, активных в отношении кокков, в т.ч. энтерококков, прежде всего, следует упомянуть бензилпенициллин. Однако в силу достаточно частой высокой резистентности к нему стафилококков, особенно в госпитальных условиях, антибиотик целесообразно использовать в высокой концентрации ( не менее 500 ЕД/мл). При этом нельзя исключить ограниченного подавления или временную задержку роста некоторых грамотрицательных бактерий (в основном эшерихий). Высоким ингибиторным потенциалом обладает ванкомицин (в концентрации 30 – 100 мкг/мл). В отечественной практике резистентные к нему штаммы стафилококков и энтерококков пока не известны. Однако следует считаться с нарастающим числом сообщений за рубежом о ванкомицинрезистентных энтерококках, особенно E.faecium. Среди пенициллиназоустойчивых пенициллинов наиболее перспективен оксациллин (100 – 200 мкг/мл); остальные антибиотики этой группы менее стабильны и в питательных средах могут быстро терять активность. Эта группа антибиотиков перспективна только для подавления стафилококков. Энтерококки к ним устойчивы.

Полимиксины, особенно полимиксин М, интересны как вещества, подавляющие рост грамотрицательных бактерий, но не протеев. Последнее определяет сферу их применения в качестве компонента питательной среды.

Среди противогрибных препаратов как селекционирующее вещество наиболее изучен амфотерицин В (5 – 30 мкг/мл). Антибиотик обладает широким спектром противогрибного действия и высокой удельной активностью. На бактерии препарат не действует даже в очень больших концентрациях.

Значительным антигрибным потенциалом обладают имидазольные производные. Однако опыт их применения как селекционирующих агентов пока мал.

Существует ряд прописей, сочетающих несколько противомикробных веществ, для выделения различных представителей кишечной флоры: эшерихий, сальмонелл, шигелл, кампилобактерий, энтероккков, некоторых облигатно анаэробных бактерий, лактобактерий. Они выпускаются во флаконах, содержимое которых расчитано на литр питательной среды.

Приведенные выше питательные среды рассматриваются в большей степени как селективные, хотя некоторые из них являются одновременно и дифференциальнодиагностическими. Это тем более так, если учесть, что селективность тоже служит диагностике. Как известно, имеется большая группа питательных сред, которые предназначены исключительно для дифференциации различных микроорганизмов, в том числе (если не сказать в значительной степени) представителей кишечной группы. Рассмотрим некоторые из них.

Самый широкий круг питательных сред, используемых при идентификации энтеробактерий, объединен общим названием среда Гисса. Справедливости ради надо отметить, что авторское название среды не вполне точно. Гисс (Hiss) предложил обогащенную среду (с бычьей сывороткой), «лакмусовой настойкой» и углеводом (инулин). Этот вариант был предназначен для работы с коринебактериями и для дифференциации пневмококков от стрептококков. В дальнейшем упрощенный вариант среды был предложен для дифференциации энтеробактерий. Возможно, это одна из причин, почему за рубежом название «среда Гисса» используется очень редко. Фигурируют «жидкая среда с углеводами», «среда для определения ферментации углеводов» и мн.др. названия. Существует около 20 вариантов среды, которые отличаются по углеводному компоненту и, что реже, индикатору. Литр среды содержит:

Перечень возможных сахаров дан в таблице, приведенной выше (под термином «сахара» или «углеводы» обычно понимают моно-, ди- и трисахариды, а также некоторые многоатомные спирты –– см.таблицу 8).

В зарубежных руководствах приводят более обогащенную пропись среды. Помимо названных выше компонентов добавлен 1,0 г мясного экстракта. С учетом не всегда высокого